Das Spiel findet auf der tropische Resort von Isle Delfino, der wie ein Delphin geformt und umfasst zehn primären Standorten. Die Insel ist vor allem durch den Rennen Piantas und NOKIS bewohnt. Delfino Plaza ist Isle Delfino Hauptstadt und wichtigste Knotenpunkt des Spiels. Mario legt für Isle Delfino für einen Urlaub mit Princess Peach, ihrem langjährigen Verwalter Toadsworth, und einigen anderen Kröten, in der Hoffnung für einen erholsamen Urlaub. Bei der Ankunft finden sie, dass die einst unberührte Insel wurde verschmutzt und mit Graffiti verputzt. Als Ergebnis dieser Verschmutzung, Sonnenförmige Objekte genannt "Shine Sprites", der Insel Quellen der Macht, sind verschwunden, und die Insel ist in einem ewigen Schatten bedeckt. Der Täter gesehen Verbreitung der Graffiti als Mario (als "Schatten-Mario" bezeichnet) verkleidet. Mario wird umgehend festgenommen, als er ankommt, fälschlicherweise vandalizing die Insel zu haben. Er wird vor Gericht gestellt, für schuldig befunden, und bestellte zu bereinigen, die Graffiti und erholen die Putz Sprites. Um mit der Reinigung zu helfen, Mario findet Fludd ein leistungsfähiges Wasserkanone, die wie ein Rucksack toted wird. Mario legt auf ein Abenteuer, um seinen Namen und suchen Sie den echten Verbrecher, während die Wiederherstellung der Ruhe und um Isle Delfino.
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